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考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对病理组织内的蛋白质进行染色。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
【实验方法】
Step1:石蜡切片常规操作脱蜡水化;
Step2:切片复水后经过7%(v/v)醋酸1~2min;
Step3:放入考马斯蓝R染色液中染色15min;
Step4:自水清洗5min后经过蒸馏水;
Step5:脱水:依次经85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒,无水乙醇Ⅰ30s、无水乙醇Ⅱ1min;
Step6:透明:经二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min;
Step7:中性树胶固封,镜检。
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