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MTT,CCK-8,BrdU,EdU等方法是常见的细胞增殖检测技术,分别从代谢活性和DNA合成的角度来反应细胞的增殖情况。MTT和CCK-8检测原理为活细胞线粒体中的一些脱氢酶能使检测试剂还原为甲瓒,而死细胞无此功能。BrdU和EdU则能都在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子,通过基于与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性。
细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础,与细胞凋亡、细胞周期等是肿瘤研究的重要表型,同时也是分子生物学和药理学研究的重要内容。MTT或CCK8是检测细胞增殖的常用手段,可研究药物对细胞的毒性作用;或探究过表达或干扰细胞中某个基因对细胞增殖能力的影响,为进一步研究基因的功能提供依据等。
MTT(噻唑蓝),可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中,而死细胞无此功能;结晶物能溶于DMSO中,通过酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,间接反映活细胞数量(一定范围内,OD值越大,细胞活性越强)。
CCK-8试剂中的WST-8,可在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被活细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物;用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞量(一定范围内生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比)。
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